土壤基因组DNA提取试剂盒

产品货号：

WE0187

中文名称：

土壤基因组DNA提取试剂盒

英文名称：

Soil gDNA Extraction Kit

产品规格：

50次

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的干燥土壤、湿泥、淤泥及海河沉淀物中提取总DNA。本制品使用安全方便，单个样品操作一般可在40分钟内完成。使用本制品每克土壤可获得5μg以上的DNA，片段长度主要在20～30kb之间。本试剂盒采用独特的溶液能够有效去除杂质和腐殖酸，通过优化的缓冲系统使裂解液中的DNA高效结合到吸附柱上，土壤中残留的杂质、PCR和酶反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

组分	规格
Buffer QSL	45mL
Buffer RIL	11mL
Buffer ML	10mL
Buffer GW1（浓缩）	13mL
Buffer GW2（浓缩）	26mL
Buffer EBL	13mL
RNase A	240μL
Lysis Tubes II	50个
吸附柱DM及收集管	50套

保存：室温，其中Buffer RIL需置于2～8℃保存。

自备器材

恒温混匀仪
无水乙醇，异丙醇
涡旋振荡仪或组织研磨仪

样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明预先在Buffer GW1（浓缩）和Buffer GW2（浓缩）中加入无水乙醇。
Buffer RIL待即将使用前取出，用完立即放在2～8℃储存。

短暂离心Lysis Tube以使珠子沉淀在底部。
样本收集
- 向Lysis Tube中加入0.1～0.3g土壤或粪便样本，加入740～820μL Buffer QSL与4μL RNase A，旋紧管盖，短暂涡旋以混合。
- 若为非裂解型粪便保存液[例如粪便采集保存管(货号：WE0423)]保存的粪便样本，向Lysis Tube中加入200μL～600μL固液混合物，13000rpm离心1min，弃掉保存液（若离心后的固体量过少，可再次富集，但不宜超过0.3g）。加入620μL Buffer QSL和4μL RNase A，旋紧管盖，短暂涡旋以混合。
将Lysis Tube固定在装有2mL适配器的振荡研磨装置中，并根据您的设备使用优化的研磨条件进行处理（参见附录）。
将Lysis Tube在恒温混匀仪上以70℃，1200rpm振荡10min。随后13000rpm离心2min以沉淀固体颗粒。转移540μL上清液至新的2mL离心管。
加入180μL Buffer RIL，涡旋5sec，13000rpm离心2min。
注意：Buffer RIL待即将使用前取出，用完立即放在2～8℃储存。
在新的离心管中依次加入160μL Buffer ML、480μL步骤5的上清液、320μL异丙醇，涡旋5秒。
将上步中溶液转移650μL到到已装入收集管的吸附柱DM中，12000rpm（~13400×g）离心1分钟。
倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。重复步骤7直至溶液全部转移完。
向吸附柱中加入500μL Buffer GW1（使用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
向吸附柱中加入500μL Buffer GW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
重复步骤10。
12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。
将吸附柱置于一个新的离心管（自备）中，向吸附柱的中间部位悬空滴加50～200μL Buffer EBL或灭菌水，室温放置2～5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
- 离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
- 用另外的50～100μL洗脱缓冲液或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
- 如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤13所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤13，但可能会减少总产量。
- 洗脱缓冲液不含螯合剂，请置于-20℃保存DNA。
- 基因组DNA模板中残余的微量PCR抑制物可能对PCR反应产生不良影响，可将DNA稀释2～10倍通常即可解决。

附录：使用以下方法之一研磨样本

在涡旋振荡仪上以最大速度手动涡旋振荡10分钟。
在搭配有1.5～2mL水平离心管支架的涡旋振荡仪上以最大速度振荡10分钟（让Lysis Tube保持水平放置）。若样本数量超过12，延长5～10分钟。
例如使用Scientific Industries或Mobio的Vortex-Genie2涡旋振荡仪。
使用Qiagen的TissueLyser II时，以25Hz研磨10分钟。
使用Qiagen的PowerLyzer 24 Homogenizer时，以2000rpm的速度均质化30秒，暂停30秒，然后以2000rpm的速度再次均质化30秒。
使用MP Biomedicals的FastPrep-24时，推荐速度为6.0，时间为40秒。

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